En PCR, ¿qué paso requiere una enzima termoestable?

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En PCR, ¿qué paso requiere una enzima termoestable?
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Video: PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (divulgación científica IQOG-CSIC) 2024, Marcha
Anonim

Taq polimerasa Al igual que la replicación del ADN en un organismo, la PCR requiere una enzima ADN polimerasa que genera nuevas hebras de ADN, utilizando hebras existentes como moldes. La polimerasa de ADN que se suele utilizar en la PCR se denomina polimerasa Taq, en honor a la bacteria tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus).

¿Por qué se requiere una ADN polimerasa termoestable para PCR?

aquaticus es una bacteria que vive en fuentes termales y respiraderos hidrotermales, y la Taq polimerasa se identificó como una enzima capaz de soportar las condiciones de desnaturalización de proteínas (alta temperatura) requeridas durante PCR.

¿Qué paso se usa en la enzima termoestable PCR?

Se utiliza una polimerasa de ADN termoestable en ciclos repetidos de hibridación de cebadores, síntesis de ADN y disociación de ADN dúplex para servir como nuevas plantillas. La amplificación teórica del ADN molde, suponiendo que los reactivos no sean limitantes y que la enzima mantenga su actividad total, es 2 donde n es el número de ciclos.

¿En qué pasos de la PCR se utilizan las enzimas?

Tres pasos de PCR─desnaturalización, recocido y extensión─como se muestra en el primer ciclo, y la amplificación exponencial del ADN objetivo con ciclos repetidos.

¿Qué enzima se utiliza para la amplificación en PCR?

La ADN polimerasa Taq se usa comúnmente para amplificar productos de PCR de 5 kb o menos. Los productos de PCR en el rango de 5 a 10 kb se pueden amplificar con la ADN polimerasa Taq, pero a menudo requieren más optimización que los productos de PCR más pequeños.

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